你好,请问这个问题:SDS-PAGE 电泳后如何将凝胶消融掉? 你获得谜底了吗?能否奉告?谢谢! 我的方法是: 先跑SDS-PAGE,然后用预冷的0.25M KCl染色(预先放在4度冰箱中),目的条带会出现白色条带,根据你已经跑过的考马斯亮蓝染色的位置可以判断哪条带是你的目的条带,如果蛋白浓度高的话,染1分钟就可以看见目的条带,蛋白浓度低的话,要染时间长一些,大概5-10分钟,如果太低,估计是看不到目的条带了。无法用此方法看见目的条带。那用该方法就不行了。 注意:蛋白浓度底,目的条带颜色很浅,要在违景深色的时候才能看见(可以放在透明的玻璃板上操作),因为这种染色方法灵敏度比考马斯亮蓝染色低许多。 当看见目的条带时,可用一干净的刀片切下目的蛋空白土地点的凝胶条带,将凝胶条放在蒸馏水里浸泡,直至无色透明,目的是使得KCl离开胶条(当然目的蛋白会损失一些,但绝大大都还在胶里,因为这个自由扩散的过程不会过久),一般也就是五到十分钟就可以目测不雅察到胶条变成无色透明状。 将无色透明的胶条从蒸馏水中取出,装入一准备好的1.5ml离心管中,用小镊子夹碎(或在放入离心管以前用刀片切碎),我常用的是灭过菌的小镊子夹碎。然后再在管里加入你所需要消融蛋白的溶液,比如蒸馏水(生理盐水或PBS等)。将离心管放入4度冰箱留宿,第二天吸出管中的液体(吸以前震荡一下),至少50%蛋白可以从凝胶中析出(这要看你的凝胶和水溶液的体积比)。再加入蒸馏水抽提两次,就可以将胶条中绝大部分蛋白抽提出。 我对多次抽提的蛋白经Brandford考马斯亮蓝染色法测蛋白浓度测定,证明浓度依次递减,后一次的浓度均不超过上次的50%。 我所获得的蛋白浓度可达到1mg/ml。经电泳检测,只有单一条带。无任何杂带。 对后面抽提的浓度比较低的,浓缩的办法许多。也可选最简单的办法。Novagen有专门用于page胶收受接管的电洗脱管子,很方便,我用过,所得的蛋白浓度在0.5-1mg/ml。多谢!多谢!!今朝正自做带His-tag标签蛋白的醇化,效果不比人意。 蛋白质变性了,还提来干嘛 透析吧,硫酸铵沉淀 选一体化加药装置请认准上海龙亚品牌，O21-6l57088,6l557288。钛龙一体化加药装置——一次购买，终身无忧。O(∩_∩)O~。
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